Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Определение активности провокационного токсина. При необходимости, невакцинированным контрольным животным вводят разведения, содержащие 80, 40, 20, 10 и 5 миллионных долей Lf провокационного токсина.
Получение и интерпретация результатов. Все точки провокации контролируют через 48 часов после инъекции провокационного токсина и записывают частоту возникновения специфической дифтерийной эритемы. Записывают также количество точек, в которых такие реакции не возникли и обозначают это количество как сумму интрадермальной провокации. Суммы интрадермальной провокации для всех животных, получивших одно и то же разведение вакцины, сводят в таблицу и используют эти данные после подходящего преобразования, например, (сумма)2 или arcsin((сумма/6)2) для оценки
относительной активности для каждого из испытуемых препаратов методом параллельных линий.
Требования к достоверности определения. Результаты испытания являются достоверными, если:
- как для испытуемой вакцины, так и для препарата сравнения, средняя сумма, полученная для нижнего уровня дозировки, менее 3, а средняя сумма, полученная для верхнего уровня дозировки, более 3,
- в случае проведения соответствующего испытания, разведение токсина с содержанием 40 миллионных долей Lf приводит к положительной эритеме не менее чем у 80% морских свинок, а разведение с содержанием 20 миллионных долей Lf приводит к положительной эритеме менее чем у 80% морских свинок (если эти критерии не выполняются, следует выбрать другой токсин),
- границы доверительного интервала определения (Р = 0,95) составляют от 50 до 200% от оцененного значения активности,
- при статистическом анализе не выявляется отклонений от линейности и параллельности.
Испытание может быть выполнено повторно, но если было проведено более одного определения, то при оценке активности должны учитываться результаты всех достоверных экспериментов.
МЕТОД ЛЕТАЛЬНОЙ ПРОВОКАЦИИ
Выбор и распределение испытуемых животных. В испытании используют здоровых морских свинок из одной партии с массой тела от 250 до 350 г. Морских свинок делят не менее, чем на шесть равных групп; количество животных в группах должно быть достаточным для получения результатов, выдерживающих требования к достоверности определения, приведенные ниже. Если не было показано, что используемый токсин достаточно стабилен, или если он не был адекватным образом стандартизирован, дополнительно используют четыре группы по пять морских свинок в качестве невакцинированного контроля. Используют морских свинок одного пола; в иных случаях самцы и самки должны быть равномерно распределены по группам.
Выбор провокационного токсина. Препарат токсина дифтерии должен содержать не менее 100 LD50 в миллилитре. Если было показано, что препарат токсина обладает стабильностью, проверка его активности перед каждым определением не является обязательной.
Приготовление раствора провокационного токсина. Непосредственно перед использованием провокационный токсин разбавляют подходящим растворителем с получением раствора провокационного токсина, содержащего около 100 LD50 в миллилитре. При необходимости порции раствора провокационного токсина разбавляют тем же растворителем в соотношениях 1:32, 1:100 и 1:320.
Определение активности вакцины. Используя раствор натрия хлорида R концентрацией 9 г/л, готовят разведения испытуемой вакцины и препарата сравнения таким образом, чтобы для каждого из препаратов был получен ряд с не более чем 2,5-кратным различием между последовательными разведениями и в котором промежуточные разведения при подкожном введении морской свинке в дозе
1.0 мл защищают около 50% животных от летальных эффектов, вызываемых подкожным введением количества дифтерийного токсина, предписанного для этого испытания. Растворы каждого разведения назначают одной из групп морских свинок, каждой из которых вводят подкожно по 1,0 мл этого разведения. Через 28 дней каждому животному вводят подкожно по 1,0 мл раствора провокационного токсина (100 LD50).
Определение активности провокационного токсина. При необходимости, раствор провокационного токсина и три приготовленных из него разведения назначают по одному каждой из 4 групп по 5 морских свинок и вводят подкожно по
1.0 мл каждого разведения каждой из морских свинок группы, которой это разведение было назначено.
Получение и интерпретация результатов. Через 4 дня после инъекции провокационного токсина подсчитывают число выживших морских свинок. Активность испытуемой вакцины вычисляют относительно активности препарата сравнения с использованием обычных статистических методов на основе пропорции выживших животных в каждой из групп вакцинированных морских свинок.
Требования к достоверности определения. Результаты испытания являются достоверными, если:
- как для испытуемой вакцины, так и для препарата сравнения, 50% защитная доза заключена в интервале между наибольшей и наименьшей дозами препарата, введенными морским свинкам,
